螢光定量pcr之後計算目的基因的相對表達量一般採用2-△△ct的方法。我們還是假設對照組和處理組各有三個生物學重複(即對照組3個cdna樣品cdna1, cdna2, cdna3,處理組3個cdna樣品cdna4, cdna5, cdna6),三個技術重複(即每個cdna的每個基因點三個孔)。
1. 跑完程式後,先看一下溶解曲線。如果熔解曲線的峰比較單一,而且同乙個基因的峰基本重合,說明沒問題;如果峰比較雜亂,多峰,甚至壓根沒峰,證明結果不行,要麼引物有問題,要麼加樣有問題,或者程式搞錯了,總之自己要回想一下**出了問題。
2. 將原始ct值按照如下格式輸入excel中。
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常見螢光定量 PCR 檢測方法比較
以參照物為標準,對 pcr 終產物進行分析或對 pc r過程進行監測,從而達到評估樣本中靶基因的拷貝數,稱為定量 pcr。定量 pcr 的可行性定量一般是在 pcr 擴增的指數期進行的。下面我們來看一下幾種常見螢光定量 pcr 檢測方法。1sybr green i 檢測模式 sybr green i...
諾禾 實驗篇之螢光定量 PCR(上)
q 要把 qpcr 實驗做,統共分幾步?a 三步!q 哪三步?a 前期準備 中期操作 後期剖析!一 qpcr 實驗前期準備 前期準備主要是提取 反轉錄和引物設計區域性,我們來逐一分享。rna 提取留意事項 首先理解一下,rna 抽提準繩 保證 rna 的一級構造 無其它物質的汙染 得率高 掩蓋一切轉...
如何選購一款適合自己的螢光定量PCR儀?
1 儀器的檢測通量 在購買定量pcr儀的時候要根據實驗實的需要來選擇不同通量的儀器。目前市面上的螢光定量pcr的檢測通量小到16個多到384個。如果進行一般的基因表達研究或病原體檢測,實在不必購買昂貴的儀器,96孔的通量足夠用 需要尋找要新藥靶點和疾病標記的實驗室可以考慮購買384孔板的儀器。假如經...