以參照物為標準，對 pcr 終產物進行分析或對 pc r過程進行監測，從而達到評估樣本中靶基因的拷貝數，稱為定量 pcr。定量 pcr 的可行性定量一般是在 pcr 擴增的指數期進行的。下面我們來看一下幾種常見螢光定量 pcr 檢測方法。1sybr green i 檢測模式
sybr green i 是一種能與雙鏈 dna 結合發光的螢光染料。其與雙鏈 dna 結合後， 螢光大大增強。因此， sybr green i 的螢光訊號強度與雙鏈 dna 的數量相關，可以根據螢光訊號檢測出 pcr 體系存在的雙鏈 dna 數量。sybr green i 的最大吸收波長約為 497 nm，發射波長最大約為 520 nm。pcr 擴增程式一般為 94℃～55℃～72℃三步法，40 個迴圈。sybr green i 的缺點：由於 sybr green i 沒有特異性，不能識別特定的雙鏈，只要是雙鏈就會結合發光，對 pcr 反應中的非特異性擴增或引物二聚體也會產生螢光，通常本底較高，所以在臨床上使用可能會有假陽性發生。
sybr green i 的優點：sybr green i 的優點是因為其缺點產生，由於它能所有的雙鏈 dna 相結合，所以對不同模板不需特別定製不同的特異性探針，通用性較好，並且**相對較低。這對科研是很有利的，因此國內外在科研中使用比較普遍。
2水解探針模式( taqman 探針)
諾禾 實驗篇之螢光定量 PCR（上）
q 要把 qpcr 實驗做，統共分幾步？a 三步！q 哪三步？a 前期準備 中期操作 後期剖析！一 qpcr 實驗前期準備 前期準備主要是提取 反轉錄和引物設計區域性，我們來逐一分享。rna 提取留意事項 首先理解一下，rna 抽提準繩 保證 rna 的一級構造 無其它物質的汙染 得率高 掩蓋一切轉...
螢光定量PCR 基因相對表達量計算方法
螢光定量pcr之後計算目的基因的相對表達量一般採用2 ct的方法。我們還是假設對照組和處理組各有三個生物學重複 即對照組3個cdna樣品cdna1,cdna2,cdna3，處理組3個cdna樣品cdna4,cdna5,cdna6 三個技術重複 即每個cdna的每個基因點三個孔 1.跑完程式後，先看一...
如何選購一款適合自己的螢光定量PCR儀？
1 儀器的檢測通量 在購買定量pcr儀的時候要根據實驗實的需要來選擇不同通量的儀器。目前市面上的螢光定量pcr的檢測通量小到16個多到384個。如果進行一般的基因表達研究或病原體檢測，實在不必購買昂貴的儀器，96孔的通量足夠用 需要尋找要新藥靶點和疾病標記的實驗室可以考慮購買384孔板的儀器。假如經...