什麼是螢光原位雜交 FISH ？

什麼是fish

fish：採用了已知序列的、特異性的單鏈核酸作為探針，標記了生物素或螢光素，在一定的溫度和離子濃度下通過鹼基互補配對法則，使得dna-dna原位雜交，採用螢光法顯示，最終將dna在細胞爬片、組織切片(石蠟切片or冰凍切片)的原始位置上標記出來的一種技術。

上一代的fish還是採用的同位素進行標記，現在基本上都是螢光標記了。在此，要感謝j.g.baunlan這位大神了。

有了fish，我們可以不再僅僅依賴分子生物學的方法來檢測dna的表達了。fish技術最大的優點是可以在間期細胞核上直接觀察到dna擴增，並且螢光訊號的強度直接與dna擴增水平直接相關。這些都大大促進了分子細胞遺傳領域的科學研究，同時也是臨床上診斷腫瘤的利器。

fish的實驗要點

網上有很多關於fish的實驗步驟教程，但每個探針盒子的操作可能存在差異。懂了原理，才能以不變應萬變。因此，本部分主要是詳細討論實驗要點。

fish的大致步驟分為探針變性、標本變性、雜交、洗脫、雜交訊號放大(適用於適用生物素標記的探針)、復染、封片、螢光顯微鏡觀察fish結果。

要點：

（1）良好的前期標本製備十分重要，這點對於採用秋水仙素刺激得到中期染色體**象尤為重要。刺激時間過短或過長都會影響實驗觀察，因此需要耐心摸索作用時間。

（2）蛋白酶k的作用濃度。濃度高了極易影響細胞核形態，造成模糊不清，濃度低了則探針不易進入細胞核，雜交率大大降低。石蠟切片一般要達到10-30min，不要超過半小時，一般來說，20g/l蛋白酶k在50℃下消化20min足矣。

文章剩餘內容<<<<