● 設定標準曲線樣品的標準濃度範圍要有乙個比較大的跨度，並且要能涵蓋你所要檢測實驗樣品的濃度，樣品的濃度要在標準曲線濃度範圍之內，包括上限和下限。而對於呈s型的標準曲線，盡量要使實驗樣品的濃度在中間坡度最陡段，即曲線幾乎成直線的範圍內。
● 最好採用倍比稀釋法配製標準曲線中的標準品濃度，這樣就能夠保證標準品的濃度不會出現較大的偏離。
● 檢測標準品時，應按濃度遞增順序進行，以減少高濃度對低濃度的影響，提高準確性。
● 標準曲線的樣品數一般為7個點，但至少要保證有5個點。
● 做出的標準曲線相關係數因實驗要求不同而有所變動，但一般來說，相關係數r至少要大於0.98，對於有些實驗，至少要0.99甚至是0.999.1擬合方程
用於免疫檢測的所謂「標準曲線"其實稱為擬合曲線比較合適。免疫檢測時標準點(可以是倍比稀釋的，也可以不是)濃度如果和相應的吸光度(od)值如果能夠呈現直線關係當然是最理想的了，這時可以通過execl等方便的獲得擬合曲線，進而推算出樣品的濃度值。但我們做免疫檢測很少能夠有這麼理想的情況，標品濃度和相應od值往往是"s"型的曲線關係，這時就不能用直線擬合的方式了，而對擬合方法進行選擇就是必要的了。
關於標準曲線的擬合方式，直線、二次曲線、三次曲線、指數、對數等雖都可用於elisa及其它生物學反應中的曲線擬合，但都只適用於曲線的一部分，有的適用於前半段，有的適用於後半段，有的適用於中間一段，而logistic曲線則對曲線的全部都有較好的適用性。當然，如果用於定量，還是在中間一段較好。這些方法雖然沒有一種方法可以通用，但也都可以用。關鍵在於你的標準曲線做到了s形的哪一部分，你想檢測的樣品濃度在曲線的哪一部分。在s曲線的低濃度部分可以用乘冪方程很好的擬合，中低濃度部分可以用直線方程，中間部分可用對數方程，而中後段可用四引數。
目前國際上最流行的免疫檢測擬合方式是「四引數邏輯擬合"，用這種擬合方式往往能夠比較精確的反映濃度和吸光度的曲線關係，從而進一步比較正確的獲得樣品中待測物質的濃度值。
其實，在乙個長的區間內，logistic應該都能擬合得較為理想。但並不是說它就是萬能的。事實上不僅是elisa，其它很多生物學反應都是s形曲線，也都可以用logistic曲線擬合。但建模型是一回事，而用它來定量是另一回事。如果用來定量，s形曲線的中間段(較陡處)是比較好的，而兩端的平坦部分計算誤差會大，有時甚至會很大。
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