我取的-20度甘油儲存的菌，過夜復甦，然後按1：100擴大搖一段時間之後加iptg誘導，搖了3小時之後培養物居然變清亮了！我白思不得其解
望高手指點一下！
你說的培養物變清涼是相對於1%接種後而言的嗎?1：100擴大培養後，細菌變得有多渾濁(測定od600，一般達到0.5-1.0)?如果加入iptg後細菌生長得很慢屬於正常現象，因為iptg對細胞有毒性，加之有抗性壓力，不攜帶質粒的細胞是不生長的.關於你遇到的情況，我想可能是:
1.工程菌的問題，可能攜帶的質粒已經丟失，工程菌不具有抗性，建議在誘導前先檢測一下質粒穩定性.
2.活化誘導時加入的抗生素過低未加或失效，擴大培養時加入抗生素又過量，建議重新配製抗生素.
3.加入的iptg濃度過高.
4.培養基的問題，營養不足.
1.工程菌的問題，可能攜帶的質粒已經丟失，工程菌不具有抗性，建議在誘導前先檢測一下質粒穩定性.
2.活化誘導時加入的抗生素過低未加或失效，擴大培養時加入抗生素又過量，建議重新配製抗生素，這條也比較勉強。
3.加入的iptg濃度過高.
4.培養基的問題，營養不足. ，這條不會！
5.噬菌體汙染，導致菌體降解。可以重新轉化新的感受態細胞。
6。對部分重組菌來說，過低的誘導前菌量常導致有毒性的iptg誘導後菌體崩解。
1:不加iptg時怎麼樣。
不加iptg 時很正常。後來我換iptg重複做了一次，菌搖渾了，但菌量不大。同時我在平皿劃線挑單菌落培養，提質粒檢測發現有的已經丟失了，有的仍完好。為保險，我重新轉化了質粒。現在情況比較正常。
多謝各位戰友的指教！！！
會不會是噬菌體汙染呢？
我也懷疑過，因為實驗室有人在做噬菌體，但是在乙個單獨的屋子做。而且整個實驗室就我乙個人遇到這種情況，我想這種可能性比較小。
幸運地是，現在一切良好，進展還算順利。
謝謝大家
願人人事事進展順利！！！
我也學到了一點，謝謝
to:wangjun2002274 我的意見與您相左：
我也遇到過以上的情況，抗生素我是以50ug/ml加kan的。培養基是lb這不會有什麼問題。iptg誘導之前菌體很渾od達到0.8左右，加iptg以後3小時就變清！這個菌種是我4天前復甦的，之後放4度冰箱。但是我後來把菌種重新復甦效果挺好的！包涵體的量也挺好！我的看法是，復甦菌時間不能太長（以6-7小時為宜），即od值不能太高。尤其是bl21菌，因為它繁殖速度是dh5a無法比擬的！菌體太老再加上iptg的毒性是變清的主要原因。我認為。
我覺得可能是遭不明微生物汙染了，尤其是很快即變清亮的話十有***都是遭噬菌體了。od值高低應不是問題，我在發酵罐中od600達10左右才開始誘導都沒問題。
不曉得樓主出現問題的原因是否與此一樣：
早上我擴大培養搖了兩瓶菌，2個小時渾的很好。加iptg（不同**的即我上次出問題的和我借別人的）後，有一瓶（我上次出問題的iptg）清亮了。我認為是iptg的原因。為了更確認我用同樣的培養基和iptg又要了兩瓶，結果出我意料兩瓶都渾得很好。所以我得出以下結論：搖菌的容器有問題！！！因為最近我們實驗室換了一種洗潔淨，清洗時未洗淨！我們實驗室也有人出現類似情況（最近）。我認為殘留與iptg可能形成對細菌有毒的物質，致使菌體死亡，菌液變清！
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