新手細胞免疫螢光實驗常見問題解答
)，從細胞密度(鋪板密度、方式、種板時間)及一抗選擇及處理，dapi及封片過程總結了新手掌握免疫螢光實驗的基本準則。其核心注意事項總結如下 ：
1、明確蛋白定位，了解及**蛋白表達；
2、細胞爬片時的密度及種板方法；
3、一抗建議選擇中間濃度，特異性高低很重要；
5、dapi復染時間不宜過長；
6、細胞免疫螢光最好不封片，新手很容易在最後一步功虧一簣；
7、如果要觀察時間梯度的變化，盡量不用一次性觀察好幾個時間組，一次只觀察1-2組，不會影響螢光效果。就如上新手高階要點總結之後，筆者總結了一下免疫螢光需要特別關注的細節，以期作出更完美的效果。1、了解及**蛋白的定位例如：下圖使用肺動脈內皮細胞(
bpae )觀察線粒體的顯色，採用405nm，488nm，561nm的雷射，100x na 1.49 的物鏡對細胞內線粒體的分布進行簡單的觀察，此圖可見，單純的mito-tracker並不能清晰看見線粒體內部的結構和蛋白相關關係，因此，明確蛋白定位，根據所需解析度選擇顯微鏡、相應的螢光蛋白和探針非常重要。比如研究者應大致**觀察目標是存在於線粒體外膜表面，或者線粒體嵴上，或者僅需觀察經處理後線粒體的形態及分布以選擇不同的螢光蛋白/螢光有機小分子探針/奈米螢光探針等(一般來說螢光蛋白比小分子螢光探針體積更大，在超微顯像過程中較大小分子螢光探針等更有利於顯微結構的染色)。
(圖由作者提供，僅供示例，禁止用於其他用途，下同)
2、減少背景雜訊一張清晰的研究應當避免過多的干擾光點出現。在免疫螢光實驗中，應盡量保證每次
pbs清洗次數和時間，減少雜質。細胞免疫螢光相比較於組織免疫螢光略有區別，一抗應在孔板內完成孵育步驟，載玻片上孵一抗時免疫組化筆乾燥結塊脫落會引起再爬片雜光。
此外盡量保證蓋玻片的潔淨非常重要。經伽馬射線處理的蓋玻片應為免疫螢光的首選材料(但**昂貴)，普通的生物研究者可以
google一下簡單但矽烷化處理protocol，提前處理好蓋玻片(使蓋玻片表面疏水且帶有正電荷)，對於有高解析度要求的螢光實驗，此步驟非常關鍵。
3、螢光的儲存常用的螢光儲存方法抗螢光淬滅劑必不可少，筆者覺得dako和invitrogen的抗螢光淬滅劑非常好用，比較起來，invitrogen的價效比更高。國產的抗螢光淬滅劑目前還沒有試到特別好用的品牌。除了抗淬滅劑外，手動在抗淬滅劑裡新增一點疊氮化鈉，抗淬滅效果更優。細胞螢光實驗淬滅劑不可以過多，否則影響後期拍攝。
經過良好儲存的免疫螢光**，在常溫下放3-6個月一般來說還可以拿出來拍片(個人經驗)，遇到過特別優秀的師兄螢光片放了3年重新照相還是清晰明了。
以上就是蘑菇小姐總結的免疫螢光實驗中小細節，僅為個人經驗，歡迎批評指正，謝謝。· 新手細胞免疫螢光實驗常見問題解答
------------通知-----------
時光飛逝，轉眼間就要進入20203年的科研生涯怎麼規劃呢？
開題沒思路？課題沒基礎？
小張聊科研團隊在此特別推出了《小白科研騰飛計畫》(僅限腫瘤方向)
關注後獲取《科研修煉手冊》1、2、3、4、5、6、7、8、9
諾禾 實驗篇之螢光定量 PCR（上）
q 要把 qpcr 實驗做，統共分幾步？a 三步！q 哪三步？a 前期準備 中期操作 後期剖析！一 qpcr 實驗前期準備 前期準備主要是提取 反轉錄和引物設計區域性，我們來逐一分享。rna 提取留意事項 首先理解一下，rna 抽提準繩 保證 rna 的一級構造 無其它物質的汙染 得率高 掩蓋一切轉...
實驗總結 初中化學典型實驗總結！
化學典型實驗總結一 空氣中氧氣含量的測定1.操作步驟 在集氣瓶內加入少量水，並將水面上方空間分為5等份。用止水夾加緊膠皮管。點燃燃燒匙內的紅磷後。立即伸入瓶中並把塞子塞緊，觀察紅磷燃燒的現象。待紅磷熄滅並冷卻後，開啟止水夾，觀察實驗現象及水面的變化情況。2.實驗現象 有大量白煙產生，集氣瓶內水面上公...
c 實驗總結
鑑於周五有c 模擬考試。又是小崔出的全新的題目。所以總結一下以前做過的實驗和學過的重要的知識點或者思路 problem a 學生比大小 沒啥坑。就是實驗的測試用例不完全最開始的答案有bug重新改了之後應該沒問題了 include include using namespace std class s...