基於免疫細胞所分泌的的細胞因子檢測是判斷機體免疫功能的乙個重要指標，因而具有重要的臨床價值、包括針對許多疾病的診斷、病程觀察、療效判斷及細胞因子**監測等。但是，由於細胞因子在體內的含量甚微，給細胞因子的檢測帶來困維，要同時測定多種細胞因子對標本的要求更高，還需要複雜的儀器裝置才能定量。目前細胞因子的主要檢測方法包括：1、依賴性細胞株；2、功能檢測；3、免疫測定；4、酶聯免疫斑點實驗(elispot)；5、多聚酶鏈反應技術(pcr)；6、細胞因子微球檢測技術(cba)等。其中，著名的流式抗體公司bd-pharmingen開發了基於流式細胞儀的液相蛋白定量技術——cytometric bead array(簡稱cba)，基本原理近似於elisa的檢測，即利用微小、分散的顆粒捕獲液體待測物，並利用流式細胞儀檢測類似「三明治」的顆粒－待測物複合體所散發的螢光，從而測定待測物的數量。能從單個小樣本中獲得多個指標的資料。
cba概述
cytometric bead array(cba),即微量樣本多指標流式蛋白定量技術是乙個基於流式細胞檢測系統的多重蛋白定量檢測方法,它能夠同時對單個樣品中的多個指標進行檢測。日常實驗中,常需對溶液體系中的可溶性蛋白進行定量檢測,如細胞培養上清或血清中的細胞因子含量的定量分析,由於這些因子的含量較少,低於一般常規方法的檢測下限,使用常用的蛋白檢測方法western blot等很難檢測。bd公司利用流式細胞儀可對螢光訊號進行級數放大的特性,只需使受檢的可溶性因子附著於一些具有近似細胞直徑的微粒上,即可對受檢樣品中的各種可溶性因子進行檢測。為此,bd公司開發了的微量樣本多指標流式蛋白定量系統,簡稱cba系統,通過利用一系列帶有螢光標記的微小、分散的微球鏈結特定的捕獲抗體以捕捉溶液系統中的待測物,通過對應各種不同檢測物的特異微球上所帶有螢光強度不同從而同時測定分析樣本中多種可溶性成分的數量。
cba系統的工作原理
該系統的工作原理簡單,對應受檢系統中的每乙個檢測指標都設有不同的捕獲微球,不同的捕獲微球上包被有特異的捕獲抗體,並具有不同的螢光強度,通過捕獲微球與待測樣品溶液混合後,微球上的特異性抗體就與樣品(血清、血漿或細胞培養液)中的相應抗原或蛋白結合,最後,加入螢光的檢測抗體以形成「三明治」夾心複合物,通過流式細胞樣進行螢光檢測,便可對樣品中的各檢測因子的含量進行分析。
由於bd的cba系統中每乙個微球都能夠提供乙個和特定蛋白結合的表面,因此,每個微球就相當於乙個單獨的、包被好的elisa板;相對於傳統的elisa技術,螢光訊號顯色的靈敏度比一般化學發光的靈敏度高,加上利用流式細胞儀對於螢光訊號的高敏感性及放大作用,使用這種技術檢測未知樣品中的指標所需要的樣品濃度更低,實驗時間更短;另外,常規的elisa操作,每次只能對乙個樣本中的乙個指標進行檢測,各檢測子標間的操作需分開進行,往往造成珍貴樣本的耗費,如患者血液中免疫調節細胞因子包括ifn-γ、tnf-α、il-2等,通過bd cba系統,可同時對乙個對樣品中的多個指標進行檢測,這為一些elisa技術無法滿足的實驗提供了新的檢測手段。
cba主要的技術特點:
cba 是集 elisa 和細胞流式技術優點為一身的液相蛋白檢測技術。cba 的每一種微球 提供一種蛋白的捕獲表面，捕獲微球與待測樣品後，呈懸浮態，與 elisa 相比，能更有效 地捕獲被分析物；cba 具有 fcm 的寬範圍螢光檢測特點，對樣本需求量更少，檢測更快速、 更準確。
cba 主要的技術特點:
輕鬆實現多重檢測，最多可同時對乙個樣本中的75個目的蛋白進行精確定量。
樣本需要量小。僅需要50μl溶液就可進行一次檢測。
更高的靈敏度。分析靈敏度高達2.8pg/ml。
更高的靈敏度、更寬的檢測範圍和更好的重複性。cba技術使蛋白定量的分析靈敏度高達pg/ml級別,檢測範圍達0-5000pg/ml，所有分析只需一組標準曲線。根據抗體的螢光強度對目的蛋白定量，排除了elisa反應中酶聯放大產生的假陽性。
1. 操作簡單，省時省力。cba技術採用晶元式整合測定，所有檢測只需一組標準曲線，就可計算出每種待測蛋白濃度；操作簡單，整個流程只需要3.5小時，對待測樣本可做實時分析，縮短檢測了時間，提高了檢測效率。
1. 強大的軟體分析系統。bd cba軟體具有強大的資料處理能力，直接將目標蛋白的檢測結果換算成標準濃度；除了為使用者提供待測物的計數結果外，還能提供可視輪廓或訊號圖形以幫助使用者獲得更多的資訊。有用於macintosh和microsoft系統兩種版本供您選擇。和傳統的液相蛋白定量技術相比，cba技術是一種「多元」和「同步」的檢測技術。
cba應用的領域
流式凋亡率計算 流式細胞術檢測細胞凋亡問題
上海優寧維生物科技 qannexin v r pe 20 tests是bd 公司用於凋亡流式檢 測的試劑盒，產品顯示種屬為人，請問能否用於大鼠細胞的 檢測？a 可以。因為 annexin v 是與ps 親和，而 ps在不同種屬 間應該沒差異。在正常細胞中，磷脂醯絲氨酸 ps 只分布 在細胞膜脂質雙層...
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