合成基因
的方式有2種
①
全基因合成
：
一般對於分子較小而又不易得到的基因採用該方式。可將雙鏈基因分成若干
寡核苷酸
單鏈片段
(尤其待合成基在在
100個核苷酸以上時
)，每個片段長度控制在
40-60
個鹼基，並使每對相鄰互補的片段之間有
6個鹼基交叉重疊。在體外
將除基因兩端末端外的所有片段磷酸化。混合退火後加入
dna連線酶，即可得到較大的基因片段。如果需連線
亞轉殖
的方法，最後將亞轉殖的較大片段重組為完整的基因。採用分步
連線、亞轉殖的方法時，為便於亞克隆中**基因片段。應在片段兩側設計合適的酶切位點，由於每個亞轉殖可以分別鑑定，從而可減少順序錯誤的可能性。
②
酶促合成：
此法又稱基因的半合成。
全基因
，特別是較大的基因的全部化學合成成本昂貴，使用半合成的方法可以降低成本，從而利於普及使用。首先合成末端之間有
10-14
個互補鹼基的寡核苷酸片段，退火後以重疊區作為引物，在4種
dntp
存在的條件下，通過
dna聚合酶
i大片段
(klenow酶)
或反轉錄酶的作用，獲得兩條完整的互補雙鏈。在合成基因的結構中，應包括有轉殖和表達所需要的全部訊號及
dna順
序，基因密碼
的閱讀框架也應該同表達體系相適應。此外，由於不同種類的生物體或密碼子的使用都具有明顯的選擇性，在
基因合成
和轉殖時必須考慮這個問題。選
擇合適的密碼子，以獲得高效表達。
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