ATAC seq原理與步驟

2021-10-24 14:44:26 字數 855 閱讀 7682

atac-seq,英文全稱assay for targeting accessible-chromatin with high-throughout sequencing。用於研究染色質可及性/開放性的方法。

一、什麼是染色質可接近性/開放性?

dna與組蛋白結合後形成核小體,核小體再進一步摺疊壓縮後最終形成染色質。dna的複製和轉錄都需要將染色質緊密結構開啟,從而允許調控因子結合dna。這部分被開啟的染色質,就叫開放染色質區域(open chromation region,ocr)。開放染色質允許調控因子結合的特性稱為染色質的可接近性(chromatin accessibility)。

二、原理

轉座子:一段可以從原位上單獨複製或斷裂下來,環化後插入另一位點,並對其後的基因起調控作用的dna序列。

轉座酶:能把轉座子從相鄰序列中脫離出來。

極活躍的tn5轉座酶 能將測序接頭插入到染色質可接近區域。而染色質其他區域和組蛋白緊密結合,以核小體的形式存在,轉座酶不能作用於非開放區域。之後再通過測序分析,可得到開放染色質資訊。

注:開放與否由啟用子 promoters、增強子enhancers和其他調控元件regulatory elements以及是否能與轉錄機器accessible to transcription machinery 接觸決定。染色質的壓縮與動態的表觀遺傳密碼有關:dna甲基化、核小體位置、組蛋白結合以及修飾、轉錄因子、染色質重塑複合物和非編碼rna。

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