革蘭氏陽性菌由於細胞壁較厚，肽聚醣網層次較多且交聯緻密，經格蘭氏染色後能將結晶紫和碘的複合物牢固留在壁內，不容易被脫色液脫掉而仍然呈紫色，在此基礎上形成革蘭氏染色液試劑。
染色結果將細菌分為革蘭氏陽性菌（紫色），革蘭氏陰性菌（紅色）兩大類。
龍膽紫液-龍膽紫、乙醇
碘溶液-碘、碘化鉀
脫色液-丙酮、乙醇
沙黃染液-沙黃、乙醇
加龍膽紫溶液染色10秒，之後水洗，甩乾。
加碘溶液染色10秒，之後水洗。甩乾。
加脫色液10-20秒，之後水洗，甩乾。
最後加沙黃溶液復染10秒，之後水洗。
之後以濾紙吸乾。
龍膽紫染液ph： 5.5-2.0 5.5-2.0
染色時間應根據何種標本、塗片厚度稍做調整、白帶塗片應稍微延遲染色時間。
陳舊的標本塗片時可能會產生假陰性。
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