目前引物合成基本採用固相亞磷醯胺y三酯法。該方法具有高效、快速的偶聯以及起始反應物比較穩定的特點。主要是將dna固定在固相載體上完成dna鏈的合成,由待合成引物的3』端向5』端合成延伸,相鄰的核苷酸通過3』→5』磷酸二酯鍵連線。
固相亞磷醯胺三酯法合成引物的具體步驟如下:
經過以上四個步驟,乙個脫氧核苷酸就被連線到固相載體上。重複以上步驟,直到所有要求合成的鹼基連線完成。合成過程中可以監控脫下的保護基團dmt的顏色可以初步判定合成效率。
2. dna合成粗產物中含有什麼雜質?
主要是合成過程中產生的少量失敗片段。
3. 引物純化方式有哪些?
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