hla(human leukocyte antigen ,人類白細胞抗原)是人類的主要組織相容性複合體(mhc)的表達產物,該系統是目前所知人體最複雜的多型系統。通過hla的分型,可以找到疾病的原因,比如免疫系統疾病,超過90%的強直性脊柱炎患者,hla-b*27抗原表達為陽性,最常見的就是hla-b*27:04是致病風險亞基。要檢視hla相關的分型的臨床表現,可以去snpedia檢視。
hla-alleles提供了每個hla區域的分型表
比如:hla-b的分型
這裡用了b*07:02:01:01這個分型作為參照組,下面的都是對照組, 其中,「—」表示的是缺失,「*」表示的相同。然後和參照組不一樣的就會直接的列出agtc。
確定分型:
1.用一代測序的方法
①拿到已經設計能擴充套件b區的引物,然後通過sanger測序,得到下機的資料。在輸出測得的序列,通過和hla-b區的這個分型表進行比對(blast),就可以得到分型結果。
例如:muscle用法
muscle -in hla-b.txt -out hla-result.fasta -clw
sanger資料可以用chromas軟體。處理和檢視ab1檔案。 用法參考
r的sangerseqr處理ab1檔案 用法
2.用二代測序的方法
比如有全基因資料,可以判斷hla的分型。seq2hla
seq2hla用法:
首先把fastq按照每端進行合併成兩端資料,然後
python /software/seq2hla/seq2hla.py -1 $sample1 -2 $sample2 -r ./filename/name > results.txt
結果:在result.txt可以看到為hla-b*27:04陽性。
3.hla分型試劑盒
lead sponsors家的hla分型試劑盒是最領先的最準確的。再配合他家的非賣品分型軟體(hla sbt utype),效果非常好。
其他摸索工作就不寫了。都是一把辛酸淚呀。
blast比對可以在ncbi網頁上進行,也可以本地進行,一般不建議在本地執行
makeblastdb -in cds.seq.file -dbtype nucl -parse_seqids -out db.prefix
blastn -db db.prefix -query dna.fasta -value 0.00001 -outfmt "3 qseqid, sseqid, pident, qcovs" -perc_identity 0.90 -out out.path.file
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